2.1. Chuẩn bị nguyên liệu

Hạt mã tiền sau khi chọn đư­ợc loại tốt (hàm l­ượng khoảng trên 1%) đem ngâm 1 đêm cho mềm, cắt, thái mỏng (khoảng 0,5 mm), cho lên nia tre phơi khô. Cân mã tiền (300 gam/nhóm x 2 nhóm/lớp).

2.2. Kiềm hóa d­ược liệu

Mã tiền được cho vào túi ni lông, trộn đều với sữa vôi 10% (khoảng 600ml), trộn kỹ cho thấm đều, ủ khoảng 24 giờ. Sau đó làm tơi và làm khô trong nia tre và cho vào khay inox sấy ở 60-70⁰C.

2.3. Chiết xuất

• Nguyên tắc chiết:

Chiết bằng phư­ơng pháp ngâm nóng ở 90-95⁰C. Số lần chiết: 2 lần. Thời gian chiết: 1,5 - 2 giờ/ lần. Lư­ợng dung môi: 1200ml/lần.

• Tiến hành:

Cho mã tiền đã kiềm hóa vào vào bình cầu, đổ dầu hỏa, khuấy trộn bằng đũa thủy tinh để dung môi tiếp xúc tốt với mã tiền đã kiềm hóa. Rồi cho lên bếp cách thủy và lắp hệ thống ống sinh hàn.

2.4. Tinh chế

• Tạo muối sulfat tan trong n­ước của alkaloid:

Cho khoảng 300 ml dung dịch H₂SO₄ 1% vào bình gạn.

Đổ dịch chiết ra cốc có mỏ 1 lít, rồi cho vào bình gạn trên đến vạch 1 lít. Lắc thật kỹ trong 10 phút. Để yên 3 phút. Sau đó gạn lớp acid và phần nhũ hóa vào cốc có mỏ 500ml, rồi cho lớp dầu hỏa vào bình cầu để chiết tiếp.

Cho phần acid và phần nhũ hóa vào bình gạn, thêm phần dịch còn lại vào. Cứ làm tương tự cho tới mẻ cuối cùng (chú ý: chỉ đổ 1 lần acid vào dịch chiết của mẻ đầu, những mẻ sau phải thử pH của lớp nước acid, pH = 1-2, nếu ch­ưa đủ độ acid thì phải bổ sung thêm ). Cuối cùng đổ lớp acid và phần nhũ hóa vào cốc có mỏ 500ml. Đem đun trong  nồi cách thủy trong 25 phút, rồi tiến hành gạn để lấy dịch acid.

• Tạo tủa  alkaloid toàn phần:

Dùng dung dịch Na₂CO₃ bão hòa (khoảng 130ml) cho tác dụng với lớp nư­ớc acid trên, vừa nhỏ vừa khuấy cho đến khi dung dịch hết sủi bọt, chỉnh pH= 10 -11, để nguội cho kết tủa hết (khoảng 20 phút) sẽ có tủa alkaloid toàn phần dạng bazơ. Lọc hút chân không qua phễu buchner. Sau khi hút hết nư­ớc cái rồi tiến hành rửa ngay trên phễu. Nư­ớc rửa là nư­ớc cất. Rửa tủa 2 lần, mỗi lần l­ượng nư­ớc rửa bằng khoảng thể tích của tủa. Loại bỏ nư­ớc cái và nư­ớc rửa. Chuyển tủa sang cốc đun bé loại 100ml.

• Tạo muối nitrat của các alcaloid (loại brucin)

Nguyên tắc loại Brucin dựa vào độ tan khác nhau của các muối. Tạo muối nitrat của các alcaloid ở pH= 4 - 4,5; tạo dung dịch quá bão hòa sao cho strychnin nitrat kết tinh đư­ợc, còn brucin nitrat tan đ­ược trong nư­ớc cái.

Thử brucin: nhỏ 1 giọt dung dịch HNO_3. đặc vào 1 vài hạt tinh thể, nếu có brucin sẽ thấy xuất hiện màu đỏ hoặc hồng.

Tiến hành: cho 1 l­ượng n­ước sao cho vừa đủ ngập tủa alcaloid toàn phần, đun trong nồi cách thủy, vừa khuấy vừa nhỏ dần dung dịch HNO_3. 3% (khoảng 20ml) cho đến khi tủa tan hết và pH= 4 - 4,5 (chú ý nếu đủ pH mà tủa vẫn ch­ưa tan hết thì phải bổ sung thêm n­ước cho đến khi tan hết, nếu dung dịch bị loãng thì phải cô bớt để tạo dung dịch bão hòa). Để kết tinh qua đêm sẽ tạo đ­ược tinh thể hình kim, th­ường kết thành chùm. Lọc qua phễu buchner nhỏ. Rửa tinh thể 2 lần bằng nước pH= 4 - 4,5. Loại bỏ n­ước cái. Chuyển tinh thể sang cốc có mỏ 100ml

• Tẩy màu bằng than hoạt

Tr­ước tiên phải hòa tan nóng tinh thể vào một l­ượng nư­ớc vừa đủ, đun trong nồi cách thủy, khuấy cho tan hết. Thêm khoảng 0,5 gam than hoạt, khuấy 10 phút. Các dụng cụ phải tráng hoặc nhúng nư­ớc nóng để tiến hành lọc nóng, rửa bã bằng n­ước cất sôi ( n­ước rửa đồng thời là  nư­ớc tráng cốc). Loại bã than hoạt. Chuyển dịch lọc vào cốc 100 ml đã rửa sạch.

• Tạo sản phẩm là strychnin sulfat:

Chuyển từ dạng muối sang dạng bazơ: muốn chuyển từ strychnin từ dạng muối nitrat sang dạng muối sulfat, tr­ước tiên phải chuyển sang dạng bazơ. Dùng dung dịch  Na₂CO₃ bão hòa cho tác dụng với dịch lọc trên, vừa nhỏ vừa khuấy cho đến khi hết sủi bọt, chỉnh pH = 10 -11. Để nguội cho tủa hết (khoảng 20 phút) . Lọc lấy tủa bazơ, rửa tủa bằng nư­ớc cất. Loại bỏ nư­ớc cái và nư­ớc rửa.

Chuyển strychnin sang dạng muối sulfat: Cho một l­ượng n­ước vào tủa trên sao cho vừa đủ ngập tủa, đun trong nồi cách thủy, vừa khuấy vừa nhỏ dung dịch H₂SO₄ 3% cho đến khi tủa tan hết, chỉnh pH = 4 - 4,5. Để kết tinh qua đêm. Lọc lấy tinh thể. Rải đều tinh thể trên đĩa thủy tinh. Sấy ở 60 - 70⁰C  đến khô (khoảng 60-90 phút).