NGHIÊN CỨU INVITRO VÀ INVIVO HOẠT ĐỘNG CHỐNG VIÊM CỦA CHIẾT XUẤT METHANOL TỪ RỄ CÂY COPTOSAPELTA FLAVESCENS KORTH

Tóm tắt:

Coptosapelta flavescens Korth là một cây liana thuộc họ Rubiaceae được biết đến ở Đông Kalimantan với tên gọi Akar Tambolekar hoặc Akar Merung. Hoạt động chống viêm của nó chưa được khoa học chứng minh in vitro hoặc in vivo. Nghiên cứu hiện tại nhằm mục đích chứng minh hoạt động chống viêm của chiết xuất methanol của C. flavescens (CFR) in vitro và in vivo. Hoạt tính chống viêm của chiết xuất metanol CFR được đánh giá trong ống nghiệm bằng cách kiểm tra khả năng ổn định màng tế bào hồng cầu do hypotonicity gây ra (RBC), và nghiên cứu in vivo cho thấy tác dụng đối với viêm do carrageenan gây ra ở chân trái của Wistar chuột sau khi uống bằng miệng lúc 1 giờ trước, trong và sau khi dùng carrageenan. Kết quả nghiên cứu in vitro cho thấy EC50 của chiết xuất metanol CFR là 1.905 ± 0.119 mg / ml, thấp hơn so với indomethacin (10.288 ± 0.212 mg / ml). Nghiên cứu in vivo cho thấy chiết xuất metanol CFR ở liều 600 và 1200 mg / kg dùng 1 giờ trước và trong khi dùng carrageenan cho thấy hoạt động chống viêm, nhưng chỉ chiết xuất metanol CFR cho thấy hoạt động chống viêm ở liều 1200 mg / kg khi dùng 1 giờ sau khi dùng carrageenan. Chiết xuất metanol CFR thể hiện hoạt động chống viêm cả in vitro và in vivo.

NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Chuẩn bị chiết xuất methanol CFR Các mẫu CFR được thu thập từ huyện Paser, Đông Kalimantan và được xác định bởi Phòng thí nghiệm sinh thái học lâm nghiệp và lâm nghiệp, Khoa Lâm nghiệp, Đại học Mulawarman. Từ việc xử lý đơn giản cho đến cả thử nghiệm hoạt động chống viêm in vitro và in vivo, tất cả đều được tiến hành trong Phòng thí nghiệm dược lý, Khoa Y, Đại học Mulawarman. Đơn giản CFR và khô (300 g) được ngâm trong 1,5 lít dung dịch metanol. 5 ngày trong khi lắc, sau khi lọc metanol đã được thêm vào cặn trong 3 ngày trong khi được khuấy và điều này được lặp lại cho đến khi thu được dịch lọc rõ ràng. Tất cả dịch lọc được thu thập và làm bay hơi bằng cách sử dụng rotavapor chân không 50 ° C cho đến khi chỉ còn lại một khối nhớt. Sau đó, nó được đưa vào bình hút ẩm có chứa silica gel màu xanh trong lò ở nhiệt độ 50 ° C để tạo thành dịch chiết khô với hàm lượng nước <10%. Chiết xuất khô sau đó được cân và năng suất được tính toán và thể hiện bằng tỷ lệ phần trăm khối lượng (w / w) của trọng lượng chiết CFR khô và trọng lượng bột CFR Simplicia. Dịch chiết khô được bảo quản trong tủ lạnh ở nhiệt độ 4 ° C cho đến trước khi sử dụng.

Thử nghiệm ổn định màng trong ống nghiệm

 Sự phục hồi của tế bào hồng cầu (RBC) được phân lập từ chuột được trộn với chất chống đông máu. Máu được ly tâm ở 3000 vòng / phút trong 10 phút và các tế bào được rửa ba lần bằng isosaline (0,85%, pH 7,2). Thể tích máu được tái tạo thành huyền phù 10% v / v với isosaline. Sự phân giải gây ra bởi chất lỏng hypotonic Hỗn hợp vật liệu thử chứa 1 ml dung dịch đệm phosphate [pH 7,4, 0,15 M], 2 ml hyposedine [0,36%], huyền phù RBC 0,5 ml [0,36%] 10% v / v] với 0,5 ml chiết xuất CFR ở các nồng độ khác nhau (0,55; 1,125; 2,75; 5,5; 10,8 và 21,5 mg / ml) và thuốc indomethacin tiêu chuẩn có nồng độ khác nhau (2,75; 5,5; 13,5; 27,0; 54,0 và 108,0 mg / ml) và các biện pháp kiểm soát (aquabide thay thế hyposeine để tạo ra 100% tan máu) được ủ ở 56 ° C trong 30 phút trong bể nước và mỗi ly tâm ở 3000 vòng / phút trong 10 phút. Chất nổi trên bề mặt được đo bằng máy quang phổ ở bước sóng 560nm. Tỷ lệ bảo vệ ổn định màng được tính theo công thức:% bảo vệ = 100 - [(Mật độ quang của mẫu thử / mật độ quang kiểm soát) × 100] (Oyedapo et al., 2010; Anosike et al., 2012). Sau khi có được đường cong liều và tỷ lệ bảo vệ màng tế bào, EC50 của chất chiết xuất đã được tính toán và so sánh với thuốc tiêu chuẩn (Chandrappa et al., 2012).

Thử nghiệm hoạt động chống viêm vivo

Động vật thử nghiệm

Chuột nặng 200-300 g thu được từ Phòng thí nghiệm dược lý , Khoa Y, Đại học Mulawarman, giữ ở nhiệt độ phòng trong điều kiện ánh sáng tối 12 giờ / 12 giờ, cho ăn và uống quảng cáo tự do.

Giải phóng mặt bằng đạo đức được lấy từ Ủy ban Đạo đức của Khoa Y Đại học Mulawarman.

Cảm ứng chống viêm của chiết xuất metanol CFR đã được kiểm tra bằng cảm ứng carrageenan trên đế chuột, thể tích phù nề xảy ra được đo bằng máy đo huyết áp (Ugo Basile, Italy ). Chuột nhịn ăn trong 18 giờ trước khi điều trị, chỉ có nước được đưa ra tự do quảng cáo. Chuột được nhóm thành 3 thí nghiệm với mỗi thí nghiệm bao gồm 5 nhóm với 5 chuột trong mỗi nhóm (được tính theo công thức Federer) (Dande et al., 2010). Nhóm 1 là nhóm đối chứng âm tính (NC) trong đó chuột chỉ được cho 0,5% dung dịch Carboxy Methyl Cellulose (CMC); nhóm 2 được kiểm soát dương tính với Indomethacin 20 mg / kg BW; nhóm 3, 4 và 5 được cung cấp dung dịch chiết xuất metanol CFR ở liều 300, 600 và 1200 mg / kg BW. Tất cả các vật liệu thử nghiệm được hòa tan trong 0,5% CMC và 1 ml được dùng bằng miệng cho mỗi con chuột. Một giờ trước khi dùng carrageenan, đo khối lượng chân trái của tất cả chuột đã được đo.1) Quản lý chiết xuất metanol CFR một giờ trước khi dùng carrageenan: trước khi tiêm carrageenan, chân trái chuột được đo sau khi sử dụng vật liệu thử. Một giờ sau Carrageenan 0,1% trong 0,1 ml nước muối bình thường được tiêm dưới da vào bàn chân trái chuột, sau đó thể tích phù nề xảy ra ở đế chuột Chuột được đo bằng máy đo huyết áp. Sau đó, các phép đo thể tích phù nề hàng giờ trên đế chuột đã được thực hiện đến sáu giờ sau khi gây viêm.2) Quản lý chiết xuất metanol CFR trong quá trình cảm ứng carrageenan: Ngay sau khi tiêm carrageenan, chiết xuất metanol CFR đã được sử dụng và thể tích chân trái của chuột được sử dụng được đo, sau đó là các phép đo hàng giờ về thể tích phù nề của đế chuột đến sáu giờ sau khi gây viêm.3) Quản lý chiết xuất metanol CFR một giờ sau khi dùng carrageenan: Chiết xuất metanol CFR được đưa ra Một giờ sau khi cảm ứng carrageenan, sau đó thể tích của chuột