2.2. Chuẩn bị các hạt nano được nạp rutin

       Các hạt nano liposome nạp Rutin được điều chế bởi phương pháp hydrat hóa màng phim. Hệ thống phân phối đã được chuẩn bị trước trong môi trường ethanol (10 mL) có chứa rutin-PC-CH 0,15: 5: 1 trong thiết bị cô quay ở 40°C và 60 vòng / phút trong 1 giờ. Sản phẩm màng mỏng lipid được hydrat hóa bằng cách sử dụng hệ đệm phosphat (15 mL, pH 6,8 và chứa Tween 80) dưới tốc độ thấp trong thiết bị cô quay ở 40°C trong 30 phút. Các hỗn hợp được siêu âm trong 10 phút và sau đó được lọc qua màng lọc vi xốp 0,22 μm và để qua đêm ở 4°C. Các hệ thống phân phối trống không có rutin cũng chuẩn bị theo cách tương tự.

2.3. Đặc tính của các hạt nano được nạp rutin

2.3.1 Hiệu quả đóng gói

        Sau khi sơ chế các hạt nano RL, pha nước được thu thập ở 10000 vòng / phút trong 20 phút ở 4°C với một máy ly tâm lạnh (5810R, Eppendorf), và rutin trong pha nước được xác định là thuốc thất thoát (Yu và cộng sự, 2014; Ourique và cộng sự, 2008). Nồng độ rutin được xác định bởi Shimadzu HPLC Instrument (LC-2010A, C-18, 150 mm × 4,60 mm). Các mẫu đã được rửa giải bằng cách sử dụng metanol-nước (50:50) với axit axetic (pH biểu kiến ​​4,0) ở tốc độ dòng 1,0 mL / phút và được phát hiện ở bước sóng 352 nm. Hiệu suất đóng gói (EE) được tính toán là EE = (tổng thuốc - thuốc thất thoát) / tổng số thuốc

2.3.2 Kích thước hạt, chỉ số phân tán và thế Zeta

        Kích thước và chỉ số phân tán của các hạt nano RL trong đệm photphat với độ pha loãng thích hợp được đo bằng phương pháp tán xạ ánh sáng laze. Các tiềm năng của Zeta là được xác định bởi Zeta sizer (Kích thước hạt Laser Nano-ZS90 Máy phân tích, Malvan, Anh).

2.3.3 Tính ổn định và giải phóng rutin

       Tính ổn định của các hạt nano liposome được nạp rutin là được đánh giá sau khi bảo quản ở 4°C và nhiệt độ phòng trong sáu tháng, tương ứng. Sự phân bố kích thước hạt và EE của mẫu được xác định tại thời điểm lưu trữ. Lượng hạt nano RL 2 mL được đưa vào thẩm tách túi, sau đó ngâm trong 200 mL nước-ethanol (70:30) và lắc trong bể nước lắc ở 37°C (Ourique và cộng sự, 2008; Stancel và cộng sự, 2016). Tại các khoảng thời gian định trước, 2 mL bên ngoài phương tiện từ hệ thống đã được dùng để đo HPLC

diện tích đỉnh và thể tích tương đương của môi trường tươi đã được thêm vào hệ thống lọc máu.

2.4. Hoạt động chống oxy hóa

2.4.1. Thử nghiệm khả năng tồn tại của tế bào

       HUVECs được nuôi cấy trong DMEM bổ sung với 10% huyết thanh thai bò (FBS) và 1 mg / mL ceftriaxone trong tủ ấm ẩm ở 37°C và 5% CO₂. Lôgarit HUVECs đang phát triển được gieo vào các đĩa 96 giếng ở 5000 tế bào / giếng và được ủ để kết dính qua đêm. Sau đó tế bào bị bỏ đói với môi trường nuôi cấy chứa 0,1% FBS trong 24 giờ. Sau đó, các tế bào được ủ trước với nồng độ rutin và RL khác nhau trong 24 giờ, với sáu

nhân rộng các giếng cho mỗi nhóm và kích thích bằng H₂O₂ (1 mmol / L) tương ứng trong 4 giờ khác. Tế bào đã được xử lý với vitamin C ở nồng độ 1 × 103 μg / mL là dương tính mẫu thuốc. Sau khi ủ, 150 μL DMEM chứa 0,5 mg / mL MTT được thêm vào mỗi giếng và ủ cho 4 giờ nữa. Sau khi loại bỏ môi trường, các tế bào được đưa vào

150 μL DMSO và độ hấp thụ được ghi lại ở bước sóng 570 nm của độc giả ELISA.

2.4.2. Đo các chất nổi trên bề mặt LDH, MDA, và cấp độ NOS

        Các HUVEC được mạ ở 10 000 tế bào / giếng vào 24 đĩa giếng, với sáu giếng lặp lại cho mỗi nhóm. Các tế bào được nuôi cấy và tiền xử lý như phương pháp trên. Sau xử lý và ủ các tế bào, các chất nổi trên mặt của chúng là được thu hoạch để xác định mức NOS, MDA và LDH với các bộ dụng cụ có bán trên thị trường.

2.5. Phân tích thống kê

        Các công thức đã được chuẩn bị và phân tích trong ba lần. Tất cả dữ liệu được phân tích bằng gói phần mềm SPSS18.0 (SPSS, Hoa Kỳ). Phân tích phương sai một chiều (ANOVA) là được sử dụng để xác định sự khác biệt có ý nghĩa thống kê giữa các nhóm và phương tiện của mỗi hai nhóm khác nhau là được phát hiện với t-test. Tất cả các giá trị được biểu diễn dưới dạng xtb ± s từ ít nhất ba thí nghiệm độc lập. Thống kê mức ý nghĩa được xác định là P <0,05 hoặc 0,01.

Người viết bài: Ths. Trịnh Thị Loan

Người duyệt bài: Ths. Nguyễn Thị Thùy Trang

Nguồn báo: https://www.tiprpress.com/chmen/article/abstract/chm201604012?st=article_issue